KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN BIỂU HIỆN Ở Escherichia coli, TÁI GẤP
CUỘN MINI-PROINSULIN TÁI TỔ HỢP DUNG HỢP VỚI FERRITIN
CHUỖI NẶNG CỦA NGƯỜI
Nguyễn Thị Mỹ Trinh1, Lê Trần Thanh Nhật1, Võ Minh Trí1,2, Trần Linh Thước1,2
1PTN Công nghệ Sinh học Phân tử, ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQG Tp. HCM
2Khoa Sinh học, ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQG Tp. HCM
 

Tóm tắt
    Nhằm phát triển công nghệ sản xuất insulin tái tổ hợp để điều trị bệnh đái tháo đường ở Việt Nam, chúng tôi chọn phương án tạo insulin từ mini-proinsulin (MPI) tái tổ hợp được biểu hiện trong E. coli. Do ferritin chuỗi nặng của người (FTNh) đã được chứng minh có tác dụng cải thiện tính tan của một số protein người biểu hiện trong E. coli, chúng tôi đã tạo dòng E. coli BL21(DE3)/pFHI-TEV có khả năng biểu hiện vượt mức MPI ở dạng dung hợp 6xHis-FTNh-MPI. Dòng E. coli tái tổ hợp này biểu hiện 6xHis-FTNh-MPI tốt nhất khi được cảm ứng bằng 0,2mM IPTG ngay tại thời điểm nạp giống (OD600= 0,2) ở điều kiện lắc 160 vòng/phút, 25oC trong 24 giờ. Từ 1 lít dịch nuôi cấy, 53,2mg 6xHis-FTNh-MPI đã được thu nhận. Kết quả khảo sát cho thấy 6xHis-FTNh-MPI tái tổ hợp này có khả năng tái gấp cuộn tốt nhất trong dung dịch chứa 50mM glycine, 0,2mM β-mercaptoethanol, ở điều kiện 4oC, pH 11,5 khuấy nhẹ trong 16 giờ.
    Từ khóa: mini-proinsulin, ferritin chuỗi nặng, tái gấp cuộn, E. coli, thể vùi
 

EXAMINING THE CONDITIONS OF EXPRESSION IN Escherichia
coli, REFOLDING OF RECOMBINANT MINI-PROINSULIN FUSED
WITH HUMAN FERRITIN HEAVY CHAIN
Nguyen Thi My Trinh1, Le Tran Thanh Nhat1, Vo Minh Tri1,2, Tran Linh Thuoc1,2
1Molecular Biotechnology Lab, 2Faculty of Biology, University of Science, VNU-HCMC
 

Abstract
    To develop a production process of recombinant insulin for the treatment of diabetes in Vietnam, we have chosen the approach of making insulin from recombinant miniproinsulin (MPI) expressed in E. coli. As human ferritin heavy chain (FTNh) had been shown to have the effect of improving the solubility of several recombinant human proteins expressed in E. coli, we have cloned the E. coli BL21 (DE3)/pFHI-TEV being capable of over-expressing MPI under the fusion form of 6xHis-FTNh-MPI. This recombinant clone could maximally express the 6xHis-FTNh-MPI under the induction by 0.2mM IPTG at the beginning of inoculation (OD600= 0.2), 160 rpm of shaking, at 25oC in 24 hours. From 1 litter of culture medium, 53.2 mg of 6xHis-FTNh-MPI was obtained. Examination result has shown that this recombinant 6xHis-FTNh-MPI could be optimally refolded in a buffer
containing 50mM glycine, 0.2mM β-mercaptoethanol, under 4oC, pH 11.5 and gently stirring for 16 hours.
    Key words: mini-proinsulin, ferritin heavy chain, refolding, E. coli, inclusion body