CẤU TRÚC CHỦNG NẤM MEN PICHIA PASTORIS BIỂU HIỆN MINIPROINSULIN
TRONG TẾ BÀO CHẤT
Đào Minh Pháp1, Ngô Thị Kim Hằng1, Võ Minh Trí1,2 , Trần Linh Thước1,2
1PTN Công nghệ Sinh học Phân tử, 2 Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên,
ĐHQG-Tp. HCM
 

Tóm tắt
    Nhằm phát triển công nghệ sản xuất insulin tái tổ hợp để điều trị bệnh đái tháo đường ở Việt Nam, chúng tôi chọn phương án tạo insulin từ mini-proinsulin (MPI) tái tổ hợp được biểu hiện trong nấm men Pichia pastoris. Đoạn DNA mang gen mã hóa ZZ
domain-miniproinsulin (MPI) được tạo dòng vào plasmid sát nhập pPIC3.5K. Plasmid tái tổ hợp pPIC3.5-ZZI được biến nạp vào chủng chủ P. pastoris GS115 để tạo chủng nấm men P. pastoris GS115::zz-mpi có khả năng biểu hiện MPI tái tổ hợp dạng tan trong tế bào chất. Kiểu hình và kiểu gen của P. pastoris GS115::zz-mpi được kiểm tra bằng PCR và cắt hạn chế. Sự biểu hiện của MPI ở dạng dung hợp với ZZ domain trong tế bào chất được kiểm chứng bằng SDS-PAGE và Western blot khi chủng nấm men tái tổ hợp được nuôi cấy bằng môi trường BMMY và được cảm ứng bằng methanol với nồng độ cuối cùng 0,5% và 96 giờ.
    Từ khóa: biểu hiện gen, Pichia pastoris, mini-proinsulin, tế bào chất
 

CONSTRUCTION OF A Pichia pastoris YEAST CLONE EXPRESSING
MINI-PROINSULIN IN CYTOPLASM
Dao Minh Phap1, Ngo Thi Kim Hang1, Vo Minh Tri1,2, Tran Linh Thuoc1,2
1Molecular Biotechnology Lab, 2Faculty of Biology, University of Science, VNU-HCMC
 

Abstract
    To develop a production process of recombinant insulin for the treatment of diabetes in Vietnam, we have chosen the approach of making insulin from recombinant miniproinsulin (MPI) expressed in the yeast Pichia pastoris. DNA fragment containing the gene encoding the ZZ domain-miniproinsulin fusion protein was cloned into the integrative plasmid pPIC3.5K. Recombinant pPIC3.5-ZZI plasmid was transformed into the yeast P. pastoris GS115 to form the P. pastoris GS115::zz-mpi yeast strain which can express the recombinant MPI as a soluble protein in the yeast cytoplasm. Phenotype and genotype of P. pastoris GS115::zz-mpi were confirmed using PCR technique and restriction analysis. Expression of MPI as fusion protein with ZZ domain in the cytoplasm was confirmed by SDS-PAGE and Western blot when the yeast was cultured in BMMY medium and induced
by a final concentration of 0.5% of methanol in 96 hours.
    Key words: gene expression, Pichia pastoris, mini-proinsulin, cytoplasm