TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN HG-CSF (HUMAN GRANULOCYTE
COLONY STIMULATING FACTOR) DUNG HỢP VỚI FERRITIN
CHUỖI NẶNG CỦA NGƯỜI TRONG E. COLI
Nguyễn Thị Phương Hiếu, Liên Thúy Linh, Trần Linh Thước
Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-Tp. HCM
 

Tóm tắt
    G-CSF là một cytokine kích thích sự tăng sinh, biệt hóa, trưởng thành của bạch cầu trung tính, thường được chỉ định để điều trị bệnh giảm bạch cầu ở bệnh nhân ung thư hóa trị liệu. Trong nghiên cứu này, chúng tôi trình bày kết quả tạo dòng và biểu hiện GCSF ở dạng dung hợp với ferritin chuỗi nặng của người (FTN-H), đã được chứng minh là có tác dụng hỗ trợ khả năng gấp cuộn của một số protein người biểu hiện trong E. coli. Gen hg-csf mã hóa GCSF người và gen mã hóa FTN-H được gắn vào plasmid pET28a tạo thành vector biểu hiện pET-FHG. Đoạn 6xHis và trình tự TEV (được nhận diện và cắt chuyên biệt bởi TEV
protease) được chèn vào giữa GCSF và FTN-H để hỗ trợ việc tinh chế và thu nhận GCSF sau này. pET-FHG được biến nạp vào tế bào E. coli BL21(DE3). Sự biểu hiện của FTNHGCSF được cảm ứng bằng IPTG và đã được xác nhận bằng điện di SDS-PAGE và lai Western blot với kháng thể kháng GCSF.
    Từ khóa: neutropenia, hG-CSF, E. coli, FTN-H, protein tái tổ hợp
 

CLONING AND EXPRESSING HG-CSF (HUMAN GRANULOCYTE
COLONY STIMULATING FACTOR) BEING FUSED WITH HUMAN
FERRITIN HEAVY-CHAIN IN E. COLI
Nguyen Thi Phuong Hieu, Lien Thuy Linh, Tran Linh Thuoc
Faculty of Biology, University of Science, VNU-HCMC
 

Abstract
    G-CSF is a cytokine that stimulates the proliferation, differentiation, function of mature neutrophils and is generally used for treatment of neutropenia in cancer patients under chemotherapy. In this study, we report results on the cloning and expression of hGCSF being fused with the heavy-chain (FTN-H) of human ferritin, which had been showed to be capable of facilitate the folding of several human protein expressed in E. coli. The hgcsf gene and gene encoding FTN-H were inserted into plasmid pET28a to form expression vector pET-FHG. 6xHis tag and TEV sequence (being recognized and cleaved by TEV protease) was added between of G-CSF and FTN-H to facilitate G-CSF purification and recovery afterwards. pET-FHG was transformed into E. coli BL21(DE3). The expression of hG-CSF was induced by IPTG and confirmed by SDS-PAGE and Western blot using antihG- CSF antibody.
    Key words: neutropenia, hG-CSF, E. coli, FTN-H, recombinant protein