NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP MỚI LÀM GIÀU TRỰC TIẾP

CÁC HỢP CHẤT ANION BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN VÀ ỨNG DỤNG ĐỂ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VẾT

THUỐC CHỐNG MIỄN DỊCH RAPAMYCIN (SIROLIMUS)

 

Võ Diệp Thanh Thủy, Matthias Ferdig¹, Wolfgang Buchberger¹,

Phòng Phân Tích Trung Tâm, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên

¹ Viện Hóa Phân Tích, Đaị học Linz, Áo.

Tóm tắt

            Phương pháp điện di mao quản với đầu dò UV cho phép xác định hàm lượng thuốc chống miễn dịch Rapamycin ở nồng độ μg/L tại bước sóng 278 nm với chất điện ly nền acid có chứa sodium dodecyl sulfate và 20% (v/v) metanol. Việc xử lý và làm giàu mẫu được tiến hành bằng kỹ thuật chiết pha rắn đồng thời với kỹ thuật mới để làm giàu trực tiếp trên mao quản. Trong môi trường kiềm, phản ứng mở vòng lacton trên phân tử Rapamycin tạo nhóm carboxyl mang điện tích âm cho phép thực hiện phương pháp tiêm điện hóa. Trong quá trình tiêm, Rapamycin mang điện tích âm sẽ bị trung hòa bởi chất điện ly nền mang tính acid. Phân tử Rapamycin không mang điện tích không thể di chuyển trong điện trường sẽ được làm giàu ngay trên mao quản. Thời gian tiêm mẫu có thể kéo dài đến 300 giây với điện thế áp vào là -7.5 kV mà không có sự bành rộng của mũi trên điện di đồ. Phương pháp làm giàu mới này thích hợp cho việc phân tích các mẫu máu của bệnh nhân và có khả năng thay thế cho phương pháp sắc ký lỏng thường dùng trước đây.

 

 

A NOVEL TECHNIQUE FOR ON-CAPILLARY PRECONCENTRATION OF ANIONIC COMPOUNDS APPLIED TO THE TRACE ANALYSIS OF RAPAMYCIN IN HUMAN BLOOD BY CAPILLARY ELECTROPHORESIS

 

Võ Diệp Thanh Thủy, Matthias Ferdig¹, Wolfgang Buchberger ¹

Laboratory of Central Analysis, University of Natural Sciences

¹Analytical Chemistry Institute, Johan Kepler University of Linz, Austria.

Abstract

            A capillary electrophoresis method with UV detection at 278 nm has been developed for analysis of the immunosuppressant rapamycin (sirolimus) in human blood at low µg l^-1 levels. Separation has been achieved in an acidic carrier electrolyte containing sodium dodecyl sulphate and 20% (v/v) methanol. For sample clean-up and preconcentration, both an off-line solid-phase extraction step using a silica-based reversed-phase material and a newly developed on-capillary focussing technique have been employed. The subsequent treatment of rapamycin under alkaline conditions leads to a cleavage of the lacton bond of the molecule, generating a negatively charged carboxylic group which allows electrokinetic injection into the CE instrument. During the injection process, the negatively charged analyte migrates into an acidic carrier electrolyte, so that it becomes neutral due to protonation and is focussed at the capillary inlet. Injection times of 300 s at -7.5 kV could be applied without band broadening. Results for real samples indicated that the method is fully suited for routine applications and may be an attractive alternative to established liquid chromatographic techniques.