NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ TINH SẠCH PROTEASE TỪ

TRÙN QUẾ (PERIONYX EXCAVATUS)

 

 Phan Thị Bích Trâm¹,Dương Thị Hương Giang¹,

 Hà Thanh Toàn¹ , Phạm Thị Ánh Hồng².

(1) Trường Đại học Cần Thơ,

(2) Khoa Sinh,  Trường Đại học Khoa học Tự nhiên

Tóm tắt

Bước đầu khảo sát hệ enzyme protease từ trùn quế (Perionyx excavatus) cho thấy  phần lớn các protease trong dịch chiết enzyme thô có thể tinh sạch sơ bộ bằng tủa phân đoạn với ammonium sulfat nồng độ trong khoảng 30-80%. Nhiệt độ và pH tối ưu cho enzyme thô hoạt động trên cơ chất casein là 55^oC và pH trong khoảng kiềm 10 -12.  Enzyme thô có khả năng thủy phân fibrin mạnh ở nhiệt độ 37^oC và bị ức chế  với các mức độ khác nhau bởi các chất ức chế như sau PMSF>SBTI>TPCK>TLCK.  Dịch chiết enzyme thô qua sắc ký trao đổi ion trên cột Unosphere Q được tách thành 3 phân đoạn protein với hoạt tính protease trên cơ chất casein theo thứ tự tăng dần F1>F2>F3. Phân tích tiếp tục bằng sắc ký tương tác kỵ nước trên cột phenyl sepharose cho thấy phân đoạn F3 được phân tách thành 3 tiểu phân đoạn khác nhau F3-1, F3-2, F3-3. SDS-PAGE trong điều kiện có và không có chất khử β-mercaptoethanol, phối hợp với nhuộm hoạt tính enzyme trên gel với cơ chất casein cho thấy trong phân đoạn F1 và F2 có chủ yếu một protease với trọng lượng phân tử tương ứng cho mỗi phân đoạn  là 28,9 kDa và 30,6 kDa. Phân đoạn F3-1 và  F3-3 có protease với trọng lượng phân tử bằng nhau là 36,4kDa. Phân đoạn F3-2 có 2 protease với trọng lượng phân tử tương ứng là 35,4kDa và 24,3 kDa.

 

 

STUDY ISOLATION AND PURIFICATION OF

PERIONYX EXCAVATUS PROTEASE

 

Phan Thi Bich Tram¹ , Duong Thi Huong Giang¹ ,

Ha Thanh Toan¹, Pham Thi Anh Hong²

(1) Can Tho University,

(2) Faculty of Biology, University of Natural Sciences

Abstract

Preliminary study on proteases from earthworm Perionyx excavatus showed that almost all proteases in the crude enzyme extract can be initial purified by amonium sulfate fractionation from 30-80%. The optimal temperature and pH for crude enzyme extract was 55^oC  and pH in a range from 10-12.  These enzymes appeared to have strong activity towards fibrin at 37^oC.  The proteases activity were inhibited by different inhibitors with the following level: PMSF>SBTI>TPCK>TLCK Crude enzyme extract through ion exchange chromatography on Umosphere Q was separated into three fractions with protease activity on casein substrate in the order F1>F2>F3.  Futher analysis by hydrophobic chromatography on phenylsepharose reveal the heterogenous of the fraction F3, which consisted of F3-1, f3-2,f3-3.  SDS-PAGE under reducing and non-reducing conditions in combination with activity staining on casein-polyacrylamid gels showed that fractions F1 and F2 have only one main protein band with enzyme activity of about 28.9kDa and 30.6kDa respectively. The fractions F3.1 and F3.3 appeared to have one protease of the same molecular weight 36.4kDa, the F3.2 has two proteins bands of about 35.4kDa and 24.3kDa respectively.