BIẾN NẠP DI TRUYỀN GIÁN TIẾP NHỜ AGROBACTERIUM TUMEFACIENS VÀO NẤM BỆNH CÂY PHYTOPHTHORA PALMIVORA

Trần Hoàng Ngọc Ái, Hoàng Quốc Khánh
Viện Sinh học Nhiệt Ðới, Viện Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam

Tóm tắt:

          Biến nạp di truyền dựa trên khả năng tự nhiên của Agrobacterium tumefaciens là chuyển đoạn DNA từ Ti plasmid của nó, T-DNA, vào tế bào thực vật và nấm và hòa nhập ngẫu nhiên vào nhiễm sắc thể trong nhân tế bào. Tiến trình chuyển T-DNA phụ thuộc vào biểu hiện của gen vir (gen gây độc) của A. tumefaciens. Sự biểu hiện của gen gây độc này được cảm ứng bởi sự tiết ra của một số chất từ vết thương thực vật như Acetosyringone (AS). Sự có mặt của biên trái và biên phải ở T-DNA làcần thiết trong tiến trình này. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã biến nạp thành công vào nấm bệnh cây Phytophthora palmivora thông qua sự biến nạp gián tiếp nhờ A. tumefaciens bằng phương pháp nuôi cấy chung giữa nấm và vi khuẩn A. tumefaciens mang plasmid chứa T-DNA có gen hph kháng hygromycin B để chọn lọc nấm biến nạp. T-DNA đã hòa nhập vào trong bộ gen của nấm và ổn định qua các thế hệ nuôi cấy nấm. Sự hiện diện của gen hph trong DNA bộ gen của P. palmivora được kiểm tra bằng PCR. Nghiên cứu này là phương tiện để phân tích tính gây bệnh của nấm P. palmivora trong tương lai và thúc đẩy sự sử dụng phương pháp biến nạp hữu dụng này rộng rãi hơn trong nghiên cứu về vi nấm.

AGROBACTERIUM TUMEFACIENS - MEDIATED GENETIC TRANSFORMATION OF THE PHYTOPATHOGEN PHYTOPHTHORA PALMIVORA

Tran Hoang Ngoc Ai, Hoang Quoc Khanh

Institute of Tropical Biology,Vietnamese Academy of Science and Technology

Abstract:

          Agrobacterium tumefaciens - mediated genetic transformation is the transfer of T-DNA of Ti plasmid in A. tumefaciens into plant and fungal cells and the T-DNA randomly is integrated into the chromosomes of cell nuclei. The T-DNA transferring process depends on vir genes of A. tumefaciens. Expression of the virulent genes is induced by secretion of some substances from plant wounds such as Acetosyringone. The presence of left and right borders in T-DNA is necessary in this process. In this work, Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation was successfully applied to the phytopathogen Phytophthora palmivora by coincubation method between P. palmivora and A. tumefaciens carrying plasmids containing T-DNA with hygromycin B resistant hph gene to select transformants of the fungus. The T-DNA was integrated into the genome and was stable through cell division. The presence of hph gene in P.palmivora DNA genome was checked by PCR. These findings should facilitate future analysis of P.palmivora pathogenicity and stimulate wider use of this valuable transformation method in fungal research.